细胞膜的流动性或微粘度

细胞膜的流动性或微粘度 

    膜的流动性或者微粘度，可以通过测量结合到膜双分子层中的疏水荧光探针的荧光偏振来研究。因为荧光分子吸收偏振光的几率和发射荧光的偏振度与荧光分子相对于激发光偏振面的空间取向有关。

    若以线偏振光激发随机取向的荧光分子，那么，与激发光偏振面取向一致的那些荧光分子具有zui大的吸收。由于多数荧光分子的激发太寿命是几毫微秒的数量级，已经吸收了偏振光的一部份荧光分子，到它们发射荧光时，已经偏离开它们的原始取向，使得发射出荧光偏振面的方向将发生变化。

    若用两个互相垂直的偏振面测量发射的荧光强度之间的关系，可以估计荧光分子自由转动的程度。以I1和I2分别代表平行于或者垂直于激发光偏振面的荧光强度。

   流式细胞术测量荧光偏振常用的荧光探针为DPH（Di-phenylhexatriene）。DPH是不带电荷的疏水性物质，在水介质中几乎没有荧光，在非极性溶剂中用紫外光激发，（zui大激发波长为351nm），发蓝色荧光（zui大发射波长为430nm）。

   DPH的标记程序为：将DPH制备成溶解于THF （Tetrahydrofuran，四氢呋喃）浓度为2nM的贮液，保存于4℃暗处。用PBS稀释贮存液成为2uM的工作液，对于含约2×10⁶细胞的1ml细胞悬液（在PBS中），加入1ml DPH工作液，在37℃下消化30分钟，离心洗细胞后，重新悬浮在冷PBS中，置于冰上待流式测量。在荧光显微镜下观察DPH结合荧光，可见到细胞内膜和细胞外膜呈现明亮蓝色DPH荧光，其荧光强度约为不染色区荧光强度的30倍。

    除DPH以外，还有其它一些测量膜流动性或微粘度的荧光探针，例如DiIC18（3），它的激发zui大值为546nm，发射zui大值为565nm。还有DMA-DPH（1-（4-dimethylaminop-henyl）-6-phenylhexatriene）），它的激发zui大值为400nm，发射zui大值为500nm，DMA-DPH除光谱特性比DPH向长波方向移动外，另一个优点是向细胞内部标记比DPH慢些。