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猪ELISA试剂盒的注意事项有哪些?

更新时间:2015-10-15点击次数:1290
猪ELISA试剂盒在正式试验时,有许多事项需特别注意,首先应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。其次在猪ELISA试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
 
猪ELISA试剂盒将抗体或抗原吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0-9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4度18-24小时。即用不同的蛋白质浓度进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1-10μg每毫升。固定其它条件或采取“方阵法”在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。猪ELISA试剂盒对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
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