ABC-ELISA免疫标记技术

ABC-ELISA免疫标记技术

借助亲和素之间*的亲和力，至少要比抗原和抗体之间的结合高1万被，且两者结合迅速而稳定，故用于免疫标记技术中，可提高检测灵敏度，并可缩短反应时间。在包被寄生虫抗原的反应板凹孔中，加寄生虫感染者血清后，即形成抗原-抗体复合物，再加生物素标记的羊抗人IgG(Biotin-IgG),即与复合物相结合，再加ABC复合物（亲和素-生物素-酶结合物），即可biotin-IgG相结合，zui后用相应底物进形显色反应后，用分光光度计测定消光值，即可判读反应结果。

抗原制备 参考免疫酶测定法部分的抗原制备方法。

生物素标记羊抗人IgG 羊抗人IgG 血清经50%和33%饱和硫酸铵各盐析一次，收集γ球蛋白部分，透析后测定蛋白质含量。林用钱，用0.1mol/L NaHCO3配成1mg/ml 浓度。将生物素用N-羟基丁二酰亚胺进行酯化反应，使称为酯化生物素，然后用二甲基甲酰胺配成10mg/ml浓度以每mg抗球蛋白加0.2-0.4mg酯化生物素的比例，将酯化生物素二甲基甲酰胺溶液加入于羊抗IgG中，震荡10min，置于是稳中3-4h，然后用PBS透析24h，多次换液后，即为生物素标记物，保存备用。

生物素标记辣根过氧化物酶  案上诉生物素标记羊抗人IgG方法，制备生物素标记没

ABC溶液配制 在图文-PBS中，分别加入avidin和HRP-Bio,使各自的zui终浓度为8-12ug/ml和3-4ug/ml，置室温中混匀20-30min，即可应用，通常在临用前30min配制。

在以包被抗原的40孔反应板凹孔中，加待测血清，如ELISA法孵育、洗涤后，加biotin-IgG如赏罚孵育，洗涤、再加ABC洗涤，于37℃经15min，洗涤后加底物（邻苯二胺OPD),置37℃经10-15min，zui后用2mol/L H2SO4终止反应，用酶标检测仪测定OD值，检测时每一样本做2分，求得均值。

以健康人测得的OD均值，加2个标准差作为标准值(N0.求每一受检验本的OD值（P)与N值的比值。以P/N≥1.5-2.0，作为阳性，否则为阴性。

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