杂种细胞的选择方法

杂种细胞的选择方法

    经融合处理后会形成各种各样的融合产物，它们在培养条件下有着不同命运。未熔合的原生质体和同源融合的原生质体较快地适应培养条件而生长发育，而异源融合体，特别是远源不亲和的杂种细胞在不经过选择的情况下，常常因它们发育缓慢而受到有时生长的亲本原质体融合细胞的抑制，不易发育成杂种。因此人们设计了一些选择体系，有限选择杂交细胞，或只允许杂种细胞生长，以淘汰亲本细胞。

   zui简单的选择方法是利用双亲细胞形态和色泽上的差异来识别杂种细胞，但多数是依据下述细胞生理以创伤的特性来选择。

1. 互补生长。亲本原生质体生长要求外源激素，有时杂种细胞由于双亲的互补作用，产生内院激素，从而使得杂种细胞能再无激素的培养基上生长。
2. 营养缺陷型互补。如果一个亲本是需要盐酸的缺陷，另一个是叶绿体缺陷型病要求葡萄糖的突变体，这两者融合，可在无烟酸的培养基上选择杂种。
3. 白话体和野生型互补。如果某一些叶绿体缺失突变体能在限定的培养基上生长分化，而另一正常的亲本在同样培养基上不能发育成打的细胞团，融合后在限定培养基上选择绿色的愈伤组织或幼苗
4. 抗性互补选择。对抗性突变体或抗药性有差异的材料可采用这种方法，如下图

（5）机械分离方法。以上所讲的各种选择系统，都要求有各种突变体，然而在植物中，目前还很难做到象在微生物中那样有许多突变体可供利用。因此机械分离方法有很大意义。

（6）用离心方法可以把异核体与亲本原生质体分开，从而获得融合体。采用显微操作技术，也能把单个异核体分离出来进行培养。这两种方法仍然是依据双亲原生质体和融合体的区别来挑选异核体的，在应用上仍有限制。现在科学家发明了普遍使用的犯法，即采用无毒性的英冠标记双亲原声质体，如果是融合细胞，就必定会具有与双亲不同的荧光标记。融合反应后，利用一种电子荧光激活选择器自动分类和选择融合细胞，这是一种很有前途的选择杂种细胞的方法，预计极爱那个会在原声质体融合融合选择体细胞杂种中得到实际应用。