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Technical articles产品简介:
天然果胶类物质以原果胶、果胶(Pectin)、果胶酸的形态广泛存在于植物的果实、根、茎、叶中,是细胞壁的一种组成成分,它们伴随纤维素而存在,构成相邻细胞中间层粘结物,使植物组织细胞紧紧黏结在一起。果胶酶(Pectinase)是一类分解果胶质酶类的总称,实质是多聚半乳糖醛酸水解酶,包括原果胶酶,果胶酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类,广泛存在于植物果实和微生物中,主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。
果胶酶(PG)检测试剂盒(DNS 比色法)检测原理是果胶酶水解果胶生成β-半乳糖醛酸,与二硝基水杨酸(DNS)反应形成有色化合物,该化合物呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比,于分光光度计 540nm 处测定吸光度,通过与标准曲线比较计算出样品中果胶酶活性,主要用于定量检测植物组织或果实中果胶酶,反应颜色越深,吸光度越大,果胶酶的活性越强。该试盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
自备材料:
1、蒸馏水
2、实验材料:桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织
3、电子天平、水果刀或剪刀、研钵或匀浆器、离心管或试管、离心机、水浴锅
4、比色杯、分光光度计
操作步骤(仅供参考):
1、果胶酶提取:取果实或其他植物组织,洗净,擦干,称取剪碎的新鲜样品 3g,置于提前 4℃预冷的研钵或匀浆器,加入 3ml 4℃预冷的 Pectinase Lysis Buffer,充分研磨或匀浆后转入离心管或试管,4℃ 10000g 离心 10min,留取上清液,即为果胶酶提取液,4℃保存待用。
2、稀释半乳糖醛酸标准液:取适量的半乳糖醛酸标准(1mg/ml),按下表进行稀释:
加入物(单位:μl) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
半乳糖醛酸标准(1mg/ml) | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
Pectinase Lysis Buffer | 80 | 60 | 40 | 20 | 0 |
半乳糖醛酸浓度(μg/ml) | 200 | 400 | 600 | 800 | 1000 |
3、加样:按照下表设置空白管、标准管、对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡,小心混匀。如果样品中的果胶酶活性过高,可以减少样品用量或适 当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置 2 平行管,求平均值。
加入物(单位:ml) | 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 |
Pectinase Lysis Buffer | 0.3 | — | — | — |
半乳糖醛酸标准(1~5 号管) | — | 0.3 | — | — |
果胶酶提取液 | — | — | 0.2(提前煮沸 5min) | 0.2 |
Pectinase Assay Buffer | — | — | 0.1 | 0.1 |
— | 37℃水浴 1h。 | |||
DNS 显色液 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
4、测定:沸水浴 5min,自来水中将离心管或试管冷却至室温,以蒸馏水稀释至 2.4ml, 混匀,比色杯光径 1cm,以空白管调零,以分光光度计立即系列标准管、对照管、测定管在 540nm 处吸光度。
注意事项:
1、 取样量、试剂用量应根据果胶含量适当调整。
2、 可溶性糖对测定结果有较大影响,应去除样品中的可溶性糖。
3、 Pectinase Lysis Buffer 应密闭保存,避免有效成分挥发。
4、 37℃水浴 1h 后,应立即加入 DNS 显色液。
5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6 个月有效;低温运输,按要求保存。