水土亚硝酸盐含量测定试剂盒说明书

微量法 100T/96S

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

亚硝酸盐广泛存在于水体和土壤中，不仅是有机氮分解的重要中间产物，也可能来自污染。人体摄入过量后，可诱发消化系统癌变。

测定原理：

在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与 N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物，在540nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×2 瓶，室温保存。

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品处理：

1.土壤样品：准确称取过筛后的土壤约0.2g，加入 1.5 mL 提取液，室温震荡 1h，8000g， 25℃离心 15min，静置，待其分层后，取上清液待测。

2.水样：直接检测；如果浑浊，可以离心后再测定。

测定步骤和操作表：

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、 操作表

注意：空白管只需测定一次。

亚硝酸盐含量计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为：y=0.234x + 0.0002，R2= 0. 999 

x 为标准品亚硝酸钠浓度（μg/ml）                    

y为吸光值A。

（1）土壤样品

 NO2-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.234×V 样÷（V 样÷V 样总×W）×0.6668

=（A – 0.086）÷0.234×1.5×0.6668÷W

=4.27×（△A-0.0002）÷W

（2）水样

NO2-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.234×0.6668

=2.85×（△A-0.0002）

V 样总：加入提取液体积，1.5 mL； V 样：反应中样品体积，0.07mL；W：样品质量，g。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为：y=0.141x +0.0002，R2= 0. 9991 x 为标准品亚硝酸钠浓度（μg/ml）

y 为吸光值A。

（1）土壤样品

NO2-（μg/g ）=（△A-0.0002）÷0.141×V 样÷（V 样÷V 样总×W）×0.6668

=（△A-0.0002）÷0.141×1.5×0.6668÷W

=7.09×（△A-0.0002）÷W

（2）水样

 NO2-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.141×0.6668

=4.73×（△A-0.0002）

V 样总：加入提取液体积，1.5 mL； V 样：反应中样品体积，0.07mL；W：样品质量，g。

注意事项：

1.试剂盒 2-8℃保存。

2.试剂对人体有一定的危害，请穿实验服，戴手套操作。

3.若检测出得OD值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释（A540 <0.09 浓缩，A540 > 1.5 适当稀释）。

4.低检出限为 0.5μg/g