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Technical articles产品简介:
茶多酚(Tea Polyphenols,TP)是茶叶中多酚类物质的总称,包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等,是一类儿茶素为主体的黄酮化合物,儿茶素占60~80%, 具有 C6-C3-C6 碳骨架结构,是一种重要的天然抗氧化物质,能够清除自由基。类物质茶多酚又称茶鞣或茶单宁,是形成茶叶色香味的主要成份之一,也是茶叶中有保健功能的主要成份之一,研究表明茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用,能有效地阻止放射性物质侵入骨髓,并可使锶90和钴60迅速排出体外。
茶多酚(TP)检测试剂盒(酒石酸铁比色法)检测原理是以酒石酸铁为底物,利用茶多酚与酒石酸铁反应,生成稳定紫蓝色化合物,以分光光度计540nm 处测定吸光度,在一定范围内吸光度与颜色深浅的变化成正比,与标准曲线比较进而计算茶多酚含量,主要用 于测定植物组织、血清等样品中茶多酚含量,尤其适用于测定茶叶中茶多酚含量。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
1、准备样品:
①植物样品:取 0.2g 植物组织,研磨成粉末,加入煮沸的蒸馏水10ml,沸水浴浸提20min,用200 目细胞筛过滤,滤渣再继续置于新的煮沸的10ml 蒸馏水,相同操作提取一次,合并两次滤液,5000r/min 离心15min,取上清液,即为茶多酚提取液,4℃避光保存,用于茶多酚的检测;绿茶等液体样本可直接用该试剂盒测定。
②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可直接用本试剂盒测定。
③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要可用蒸馏水进行适当匀浆,5000r/min 离心 15min,取上清液,即为茶多酚提取液,4℃避光保存。
④高浓度样品:如果样品中含有较浓度的茶多酚,可以使用蒸馏水进行适当稀释。
2、配制系列茶多酚标准:用蒸馏水和茶多酚标准(1mg/ml),按下表进行操作,依次稀释。
加入物(μl) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
茶多酚标准(1mg/ml) | 10 | 25 | 50 | 150 | 250 | 400 |
蒸馏水 | 490 | 95 | 450 | 350 | 250 | 100 |
相当于茶多酚含量(μg/ml) | 20 | 50 | 100 | 300 | 500 | 800 |
、3.TP 加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡;如果样品中的 TP 浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置2平行管,求平均值。
加入物(ml) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
蒸馏水 | 0.5 | 0.25 | 0.25 |
系列茶多酚标准(1~6 号) | - | 0.25 | - |
待测样品 | - | - | 0.25 |
TP 显色液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
TP Assay Buffer | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
4、TP 测定:以空白调零,比色杯光径 1.0cm,分光光度计测定 540nm 处标准管、测定管的吸光度。
以系列茶多酚标准浓度(1~6 号)(20、50、100、300、500、800μg/ml)为横坐标, 以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程。以测定管吸光度代入回归方程求得提取液中 TP 含量。