苏木素伊红(HE)染色液套装(含分化液)说明书

产品简介：

苏木素伊红(HE)染色液套装(含分化液)中苏木素染色液采用 自主研发的配方，由进口的高纯度苏木精、氧化剂等组成，不含甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好，其特点是不易产生沉淀和金属膜；应用范围广，可以用于人、动物、畜牧、 水产等领域，可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等。苏木素染色液和伊红染色液均可以重复使用。该产品仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

染色原理：
1、细胞核染色原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色，细胞核内染色质的成分主 要是 DNA，在 DNA 双螺旋结构中两条核苷酸链上的磷酸基向外，使 DNA 双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏 木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色，细 胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的 pH 值密切相关，当染色液 pH 值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质 带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分 化作用，所用的溶液称为分化液。在 HE 染色中常用 0.5－1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用盐 酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红 染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。
4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除

去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用，另外用自来水(尤其是温水)浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

自备材料：

1、二甲苯或浸蜡脱蜡透明液、系列乙醇、返蓝液、自来水或蒸馏水

2、乙醇混合固定液、4%多聚甲醛、中性树胶或环保封片胶

操作步骤(仅供参考)：
(一)石蜡切片染色

1、切片脱蜡至水
①二甲苯或浸蜡脱蜡透明液(DZ2011)作用 2 次，每次 5～10min。
②(可选)无水乙醇作用 2 次，每次 3～5min。
③95%乙醇                                    3～5min
④90%乙醇                                    3～5min
⑤80%乙醇                                    3～5min
⑥自来水或蒸馏水(亦可用 30~40℃温水)冲洗     1～3min
2、染色
①苏木素染色液染色                           3～8min
②自来水或蒸馏水冲洗                         5～10s
③酸性乙醇分化                               2～5s
④自来水冲洗                                 20～30s
⑤返蓝液或温水返蓝                           20～40s
⑥自来水冲洗                                 30～60s
⑦伊红染色液(水溶)染色                       20～60s
⑧自来水冲洗                                 30～60s

3、脱水、透明、封固

①80%乙醇                         10～20s

②90%乙醇                         10～20s

③95%乙醇作用 2 次，每次 1～2min。

④无水乙醇作用 2 次，每次 2～3min。

⑤二甲苯或浸蜡脱蜡透明液(DZ2011)透明 3 次，每次 2～3min。

⑥中性树胶封片。

(二)冰冻切片染色

1、-乙醇混合固定液      5～10s

2、自来水冲洗               2～5s

3、苏木素染色液滴染 1～5min(可加热至 50℃)。

4、自来水冲洗               2～5s

5、酸性乙醇分化             2～5s

6、自来水冲洗               2～5s

7、返蓝液或温水返蓝         2～5s

8、自来水冲洗               5～10s

9、伊红染色液(水溶)染色     2～20s

10、自来水冲洗              5～10s

11、80%乙醇                 1～2s

12、95%乙醇                 1～2s

13、无水乙醇                2～5s

14、苯酚二甲苯(1:3)         2～5s

15、二甲苯或浸蜡脱蜡透明液(DZ2011)透明 3 次，每次 2～5s。

16、中性树胶封片。

染色结果：

细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

注意事项：

1、切片脱蜡应尽量干净；温度低时，可在恒温箱 60~70℃处理。

2、系列乙醇应经常更换新液。

3、酸性乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便清洗酸。

4、-乙醇混合固定液是由和95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸，密闭保存。

5、冷冻切片染色时间尽量要短。

6、返蓝液常使用0.2～1%氨水或 Scott促蓝液或0.1～1%碳酸溶液代替。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12 个月有效。常温运输和保存。