组织单胺氧化酶B 型（MAO－B）活性荧光定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

      组织单胺氧化酶 B 型（MAO－B）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过单胺氧化酶和过氧化

酶耦联反应系统中，在A 型单胺氧化酶抑制剂的存在下，底物对羟氧化产物过氧化氢，与非荧光

性染料乙酰二氢氧吩恶嗪反应产生高度荧光的羟基异吩恶唑酮后荧光峰值的变化，来测定组织裂解悬液样

品中酶活性的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种

动物或人体组织样品、部分或纯化酶样品中B 型单胺氧化酶（MAO－B）的特异活性检测，以及抑制

剂和激活剂的筛选。常用于药理学、毒理学等研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

保存方式

保存GENMED 清理液（Reagent A）在 4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；GENMED 反应液（Reagent

D）和GENMED 标准液（Reagent F）避免光照，有效保证 6 月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器

15 毫升锥形离心管：用于样品制备的容器

恒温培养箱：用于反应液孵育

微型台式离心机：用于样品制备

比色皿或酶标板：用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。反应液（Reagent D）避免光

照。然后进行下列操作。

一、 样品准备

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定500 毫克组织重量

2． （选择步骤）放进预冷的15 毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入xx 毫升清理液（Reagent A）清洗1 次

4． 移入到一个液氮冻存管

5． 即刻放进液氮罐过夜

6． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）

7． 放进一个15 毫升锥形离心管

8． 加入置于冰槽里的xx 微升 裂解液（Reagent B）

9． 强力涡旋震荡30 秒，充分混匀

10．放进冰槽里孵育30 分钟，期间每10 分钟强力涡旋震荡30 秒（注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱

里储存备用）

11．即刻放进4℃台式离心机离心10 分钟，速度为1000g

12．小心移取上清液到新的无菌的1.5 毫升离心管

13．移取 10 微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－

GMS30030.1）

14．放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用

二、 测定准备

1. 准备好上述待测样品，置于冰槽里

2. 设定好荧光分光光度仪或荧光酶标仪（温度为37℃）：激发波长530nm，散发波长590nm，并置零

3. 准备好5 个1.5 毫升离心管，标记为1 至5 号管

4. 加入xx 微升 缓冲液（Reagent C）到1 号管

5. 分别加入xx 微升GENMED 缓冲液（Reagent C）到2 至5 号管

6. 移取xx 微升GENMED 标准液（Reagent F）到1 号管，混匀

五、 计算样品活性

＝纳摩尔/毫克/小时

六、 酶标板测定

1． 在 96 孔酶标板上做好相应标记：标准样品和待测样品

2． 分别移取 xx 微升 GENMED 缓冲液（Reagent C）到相应孔中

3． 分别加 xx 微升待测样品（50 微克蛋白总量）或上述制备的 GENMED 标准液（Reagent F）

4． 分别加入 xx 微升 GENMED 反应液（Reagent D）

5． 分别加入 xx 微升 GENMED 底物液（Reagent E）

6． 轻轻摇动酶标板

7． 在 37℃温度下孵育 60 分钟

8． 即刻放进荧光酶标仪检测：获得相对荧光读数

9． 构建标准曲线：纵座标（Y 轴）为相对荧光单位；横座标（X 轴）为标准羟基异吩噁唑酮浓度（纳摩

尔/升）

10．根据标准曲线获得样品对应羟基异吩噁唑酮浓度

11．活性计算：

＝纳摩尔/毫克/小时

注意事项

1． 本产品为 20 次操作，包括标准样品

2． 操作时，须戴手套

3． 建议样品保存在－70℃冰箱里

4． 系统操作过程中，背景测定只需 1 次

5． 加样后 3 秒内比色测定

6． 测定值由低到高变化；测定可以持续 60 分钟

7． 荧光测定后，比色皿须清洗

8． 样本测定 60 分钟读数高于 0 分钟读数表明具有酶活性

9． 建议待测样本蛋白浓度为 50 微克/50 微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量（本

公司提供 GENMED Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒 GMS30030.1）

10．如果用户没有匹配的荧光滤波器，可以使用 530 至 570nm 激发波长和 590 至 600nm 散发波长的任一波

长替代

11．如果用户没有荧光分光仪，可以使用分光光度仪替代，波长为 570nm

12．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

13．单胺氧化酶 B 型单位活性定义为：在 37℃，pH 7.6 条件下，每小时内能够氧化产生 1 微摩尔羟基异吩

恶唑酮所需的酶量作为一个活性单位

14．本公司提供系列单胺氧化酶类检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感