组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP）活性测定试剂盒说明书

更新时间：2022-12-12

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规格：50管/24样

注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。

测定原理：

在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基安替比林和铁氰化反应红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算AKP 活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体×1 瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体×1 瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。

标准品：液体×1 支（EP 管中），2 μ mol/mL 酚标准液，4℃保存。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g 离心 10min，取上清液待测。

2. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。

测定步骤：

1. 分光光度计预热30min，调节波长到510nm，蒸馏水调零。

2. 试剂三置于37℃水浴中预热30min。

3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸馏水，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。

4. 标准管：取EP管，加入20μL标准品，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm 测定吸光度，记为A标准管。

5. 对照管：取EP管，加入200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀；最后加入20μL上清液，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A对照管。

6. 测定管：取EP管，加入20μL上清液，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm 测定吸光度，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。