产品简介：聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应，它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)，两种聚丙烯酰胺凝胶电泳在操作上基本上是相同的，只是非变性聚    丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如 SDS 等，在电泳的过程中蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离某种特定的有生物学活性的成分；SDS-PAGE 使用变性剂 SDS 使蛋白溶解、变性并带上大量负电荷，每微克蛋白质结合 SDS 的量是一定的，这样就使每单位质量蛋白质有一定的电荷密度， 因此可以根据多肽链的分子质量进行分离。常规SDS-PAGE 凝胶电泳适用于分离大分子蛋白，对于小分子量的蛋白或多肽，分辨率大大降低，则需要用 Tris-Tricine 缓冲液系统电泳。

 Tricine-SDS-PAGE 电泳能够较好的分离 10KD 以下的蛋白或多肽，是电泳法分离多肽的主要方法，Gel Buffer 含有 pH 值为 8.45 的 Tris-HCl 缓冲液和 SDS，30T 一般可以配制 30～35 块胶，具体配制的量应根据器具大小决定，电泳分离后可直接考马斯亮蓝染色、银染等。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

1、配制 10%过硫酸铵(APS)：直接在 0.3g Ammonium Persulfate 中加入 3ml 蒸馏水(1g 每瓶加入 10ml 蒸馏水)，充分溶解，分装成小份储存于-20℃或 4℃。

2、按照附表配制分离胶，根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度：

①将不同体积的蒸馏水、49.5%T 6%C、Gel Buffer、Glycerol 加入到离心管中并充分混合。

②加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。

③在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1mm mini-gel，分离胶溶液加约 4ml），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层 1～3cm 的水层，使凝胶表面保持平整。

④静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。3、按照附表配制夹层胶：

①去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。

②将不同体积的蒸馏水、49.5%T 3%C 和 Gel Buffer 加入到离心管中混合。

③加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。

④将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于 1mm 的 mini-gel，夹层胶溶液加约1ml)，然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层 1～2cm 的水层，使凝胶表面保持平整。

⑤静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。    4、按照附表配制浓缩胶：

①去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。

②将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和 Gel Buffer 加入到离心管中混合。

③加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。

④将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

⑤静置，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔，进行电泳操作。

5、电泳：将电泳槽置于 4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V 预电泳 10 min，将处理好的样品加入点样孔，30V 电泳 1h，100V 电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。可选购  Tris-Tricine 阳极缓冲液(5×,pH8.9)和 Tris-Tricine 阴极缓冲液(5×)。

注意事项：

1、过硫酸铵配制成 10%溶液分装后-20℃保存，应尽量减少室温存放时间以防失效，取出的 APS 溶液可短期 4℃保存，有效避免失效的方法是分成小份，即一般用 1.5ml EP 管分装成 0.5～1ml/支，-20℃保存，每支使用 2～3 次即弃用。

2、TEMED 极易挥发，使用后请盖紧瓶盖 4℃保存，另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节 TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

3、配制聚丙烯凝胶的过程中如果冬天室温较低情况下，上下层胶出现白色沉淀是正常现象，    可以置于 37℃水浴锅溶解后使用；冬天气温较低，分离胶凝固较慢，可将胶板置于空调下加速凝固。

4、在分离胶上层加蒸馏水时要缓慢，速度不宜过快。

5、49.5%T 3%C 和 49.5%T 6%C 为不同比例的 Acr-Bis，有神经毒性，请小心操作，长期使用置于 4℃有助于其性能的稳定。

6、如需测定大分子蛋白可选购 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒或SDS-PAGE 凝胶快速配制试剂盒。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6 个月有效；4℃运输，4℃保存。