技术文章
Technical articles产品简介:
脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen 法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等,其中经典的是Feulgen 法, 该法是一种经典的酶组织化学法。
Feulgen Stain 原理在于DNA 经温和的弱酸(例如盐酸)水解后,嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开,并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff 试剂结合,形成紫红色化合物,使细胞内含有DNA 的部位呈紫红色,紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团, 所以凡含有DNA 的部位就呈紫红色,该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键,因此RNA 用此法处理后则分解,所以该法不适用于证明RNA。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途
产品组成:
名称 |
3×50ml |
Storage | |
试剂(A): Schiff Reagent | 50ml | 4℃ 避 光 | |
试剂(B): SO2 水 | B1: 弱酸溶液 | 50ml | RT |
B2: 亚硫酸盐溶液 | 50ml | RT | |
使用说明书 | 1 份 |
自备材料:
1、蒸馏水、系列乙醇
2、恒温箱
操作步骤(仅供参考):
(一)石蜡切片染色
1、 组织固定:Carnoy 固定石蜡切片较好,10%福尔马林亦可,不宜采用 Bouin 固定液。
2、 配制弱酸工作液: 按弱酸溶液:蒸馏水=1:4 配制,即取 1 份弱酸溶液、4 份蒸馏水, 充分混合,即获得弱酸工作液。
3、 石蜡切片二甲苯或 脱蜡透明液脱蜡至蒸馏水。
4、 入弱酸工作液室温浸洗一下。
5、 切片入预热至 60℃的弱酸工作液,孵育 8min。
6、 切片入室温的弱酸工作液中冲洗 1min,蒸馏水冲洗。7、 切片入 Schiff Reagent,室温避光染色 30~60min。
8、 在上述染色过程中,配制 SO2 水工作液。按弱酸溶液:亚硫酸盐溶液:蒸馏水=1:5:
94 配制,即取弱酸溶液 1 份、亚硫酸盐溶液 5 份、蒸馏水 94 份,充分混合,即配即用。
9、 用新鲜配制的 SO2 水工作液洗切片 3 次,每次 90s。
10、 蒸馏水中洗净,经系列乙醇脱水,二甲苯或 脱蜡透明液透明并封片。(二)冰冻切片染色
1、 冰冻切片预处理:取 1 份乙酸、3 份无水乙醇混合即为固定液,固定 10min。
2、 由无水乙醇脱水—逐级下行—蒸馏水。
3、 配制弱酸工作液:按弱酸溶液:蒸馏水=1:4 配制,即取 1 份弱酸溶液、4 份蒸馏水, 充分混合,即获得弱酸工作液。
4、 余下步骤同上述石蜡切片染色。
阴性对照:将同样切片经上述步骤, 只有步骤 5 改为入室温弱酸工作液,孵育 15min。结果为细胞核 DNA 阴性。
1、 水解时间很重要,并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样。
固定液 | 水解时间(min) |
Carnoy 固定液 | 8min |
Helly 固定液 | 8min |
Susa 固定液 | 18min |
福尔马林 | 8min |
Zenker 液 | 5min |
2、 注意 Schiff Reagent 的纯净程度,若变浅粉红亦可考虑使用,颜色变红则弃用。3、 去除切片上多余 Schiff Reagent 的方法以 SO2 水洗为好。
4、 应做阴性对照试验。
有效期:6 个月有效。
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