注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格：50T/48S

紫外分光光度法

产品简介：

PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶， 与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算 PAL 活性。

试验中所需的仪器和试剂：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。产品内容：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 

试剂一：液体 40mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×3 瓶，4℃保存，临用前每瓶加入 4mL 双蒸水充分溶解待用；现配现用。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；

操作步骤：

一、粗酶液提取：

称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定操作表：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 290nm，蒸馏水调零。

2、操作表

混匀，静置 10min 后，用对照管调零，290nm 处记录测定管吸光值 A (A=A 测定管-A 对照管)。

PAL 活性计算：

a. 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活力单位。

PAL（U/mg prot）=A×反应总体积（1040µL）÷样本体积（20µL）÷反应时间(30min)÷0.1 ÷蛋白浓度（mg/mL）=17.3×A ÷蛋白浓度（mg/mL）

a. 按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织在每 ml 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活力单位。

PAL（U/g  鲜重）=A×反应总体积（1040µL）÷﹝样本鲜重（g）×样本体积（20µL）÷V 样总（1mL）﹞

÷反应时间(30min)÷0.1 =17.3×A ÷样本鲜重（g）