H22，小鼠腹水肝癌细胞说明书

仅供科研使用，不可用于临床诊断和治疗

冻存细胞接收后的处理：

1）干冰运输，收到细胞后推荐直接复苏，转入液氮暂存可能导致细胞复苏率降低；

2）收到细胞后，若发现干冰已经*挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。

2）75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。

3）建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。

4）如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

注：发货用培养基不可再次用来培养细胞

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①收集所有细胞悬液，1000rpm离心5min，小心弃去上清；

②用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入T25培养瓶或者60MM培养皿中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存

①收集所有细胞悬液，1000rpm离心5min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

②将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。