产品特点：

简单快速：1 h内即可获得超纯的基因组DNA。

广 泛：适用于血液、多种动物细胞和动物组织等。

超 纯：获得的DNA纯度高，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1. 使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。

2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA段较小且提取量也下降。

3. 若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

4. 所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

 操作步骤

使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1. 处理材料

a. 如提取材料为血液，可直接使用200 μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200 μl

可加缓冲液GA补足；

注意：如需处理更大体积血液，如300 μl-1 ml，应按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液 （例如，300 μl血液加入900 μl红细胞裂解液），颠倒混匀， 室温放置5 min，期间再颠倒混匀几次。10000 rpm(~11,500×g)离心1 min（若离心机高转速不允许，可3000 rpm(~3,400×g)离心5 min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200 μl缓冲液GA，振荡至*混匀。

红细胞裂解液本公司另外有售（目录号：RT122），可根据需要来决定购买。

b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5-20 μl，可加缓冲液GA补足200 μl后进行下面的裂解步骤。

c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10,000 rpm(~11,200×g)离心1 min，倒尽上清，加200 μl缓冲液GA，振荡至*悬浮；

d. 动物组织（脾组织用量应少10 mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10,000 rpm(~11,200×g)离心1 min，倒尽上清，加200 μl缓冲液GA，振荡至*悬浮。

注意：如果需要去除RNA，可加入4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15 sec，室温放置5 min。

2. 加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。

a. 提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。

b. 提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。

c. 提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。

注意：不同组织裂解时间不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化过夜）。不会影响后续操作。每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。

3.加入200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不*，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200 μl且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。

4.加人200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）， 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。

6.向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

7.向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

8.. 重复操作步骤7。

9.将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的漂洗液。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。

10.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。

注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH₂O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min。