腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏微板法)

      腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase，ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属于一种巯基酶，每分子至少含 2 个活性巯基，ADA 能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢缓和终产物为尿酸，广泛分布于人体各组织中，以    胸腺、脾和其他淋巴组织中含量高，而肝、肺、肾和骨胳肌等含量低。

      腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)其检测原理是待测样品中的 ADA 催化腺嘌呤核苷水解脱氨，产生次黄嘌呤核苷和铵离子，利用波氏显色法测定氨离子生成量，    其反应公式为：腺苷+H₂O→次黄嘌呤+NH₃，通过分光光度法(酶标仪)测定 640nm 处吸光度，根据计算公式可得 ADA 活力，100T 试剂盒可测 50~55 个样品。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

 产品组成：

自备材料：

1、离心管或小试管

2、水浴锅

3、96 孔板

4、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃    冻存，用于 ADA 的测定。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于 ADA

的测定。

③高活性样品：如果样品中含有较高活性的 ADA，可以使用 ddH₂O 稀释。

④(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的 ADA 含量。

2、稀释标准品：用 ddH₂O 准确稀释氨氮标准(1mg/ml)至 25μg/ml，即为氨氮标准工作液，4℃保存备用。

3、ADA 加样：按照下表设置空白孔、标准孔、对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后    再进行测定。

4、ADA 测定：以 ddH₂O 调零，酶标仪 640nm 处测定吸光度(分别为 A_空白、A_对照、A_标

_{准、A测定})。

计算：

ADA 活性单位的定义：在 37℃ 1ml 血清中 ADA 1h 催化底物产生 1μg 氨氮为一个ADA 酶活力单位。

血清、血浆中 ADA 活力(U/L)=(A_测定-A_对照)/(A_标准-A_空白)×25

组织中 ADA 活力(U/mg)=[(A_测定-A_对照)/(A_标准-A_空白)×25]/待测样品的蛋白浓度(mg/ml) 式中：

A_测定=测定孔的吸光度

A_对照=对照孔的吸光度

A_标准=标准孔的吸光度

A_空白=空白孔的吸光度

注意事项： 

1、 稀释样品和研磨样品所用水，均应为 ddH₂O，不可为普通的水。

2、 如果采用单位，需在测得活力单位基础上乘以 1.19。

3、 如果没有酶标仪，也可用分光光度计测定，但应注意加入试剂量不同，相应的检测次数会大大减少。

4、 采用分光光度计未调零情况下，Leagene 空白参考范围在 0.05~0.09 之间，25μg/ml 标准参考范围在 0.13~0.18 之间，由于仪器设备、操作方法以及工作环境不同，参考范围会有差异。

5、 该试剂盒测定下限在 2~5μg/ml 之间，测定上限在 70~90μg/ml 之间；从肉眼观察， 一般情况下浓度在 15~30μg/ml 即可显淡蓝色；浓度≤15μg/ml 可显淡黄色；浓度

≥30μg/ml 可显蓝色，一般情况下接近上限比接近下限更准确。

6、 胸水标本经离心后取上清，置于 4℃保存备用，ADA 活性可稳定 1 周。

7、 血清样本应避免溶血，4℃保存 3 天。

有效期：6 个月有效。4℃运输，4℃保存。