植物α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒说明书

        植物α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒说明书

可见分光光度法   规格：50管/24样

产品内容：

试剂一：25mL×1 瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；

试剂二：20mL×1 瓶，4℃保存。

产品简介：

淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热，在70℃钝化15min，从而测定α-淀粉酶活性。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

称取0.1~0.2g 样本（建议称取约0.1g 样本），加1 mL 蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管中，在室温下放置提取15min，每隔5min 振荡1 次，使其充分提取；3000g，25℃离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。

• 操作步骤和加样表（在1.5mLEP 管中依次加入下列试剂）：

分光光度计预热30min 以上，调节波长到540 nm，蒸馏水调零。

1、β-淀粉酶灭活：

70℃水浴15min 左右，冷却

2、加入试剂一并且保温：

将以上对照管、测定管和试剂二置于40℃恒温水浴中保温10min左右。

3、准确反应5min

在40℃恒温水浴中准确保温5min

4、加入试剂一，并且混匀

混匀，95℃水浴5min，冷却，540nm 处读取对照管和测定管吸光度，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。

三、α-淀粉酶活性计算：

1、标准条件下测定回归曲线为y=3.7215x -0.1778； x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。

2、α-淀粉酶活性

（1）按照样本质量计算

单位定义：每g 组织每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活力单位。

α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=1.075×(ΔA＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。

α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷（V 样×Cpr）÷T

=0.1075×(ΔA＋0.022) ÷Cpr

V 反总：反应体系总体积，0.5mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V 样总：提取液总体积，10 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。